1. 目的: この手順は、無菌操作と無菌室の保護のための標準化された手順を提供することを目的としています。
2.適用範囲：生物学的検査研究所
3. 責任者: QC スーパーバイザー テスター
4.定義: なし
5. 安全上の注意事項
微生物汚染を防ぐために無菌操作を厳密に実行します。オペレータは無菌室に入る前に UV ランプをオフにする必要があります。
6.手続き
6.1.無菌室には無菌手術室と緩衝室を備えるべきである。無菌手術室の清浄度はクラス 10000 に達する必要があります。室内温度は 20 ～ 24°C、湿度は 45 ～ 60% に維持する必要があります。クリーンベンチの清浄度はクラス100に達する必要があります。
6.2.無菌室は清潔に保つ必要があり、汚染を防ぐために破片を積み上げることは固く禁じられています。
6.3.すべての滅菌装置および培地の汚染を厳重に防止します。汚染されたものは使用を中止してください。
6.4.無菌室には、5% クレゾール溶液、70% アルコール、0.1% クロルメチオニン溶液などの使用濃度の消毒剤を備え付ける必要があります。
6.5.無菌室の清浄度が要件を満たしていることを確認するために、無菌室を定期的に滅菌し、適切な消毒剤で洗浄する必要があります。
6.6.無菌室に持ち込む必要があるすべての器具、器具、食器、その他の物品はしっかりと包み、適切な方法で滅菌する必要があります。
6.7.無菌室に入る前に、スタッフは石鹸または消毒剤で手を洗い、バッファールームで特別な作業服、靴、帽子、マスク、手袋に着替える（または70％エタノールで再度手を拭く）必要があります。細菌室で操作を実行します。
6.8.無菌室を使用する前に、無菌室内の紫外線ランプを30分以上点灯して照射滅菌し、同時にクリーンベンチのエアブローを点灯する必要があります。手術が完了したら、無菌室を適時に清掃し、紫外線で20分間殺菌する必要があります。
6.9.検査前に、試験サンプルの外箱はそのままの状態で保管し、汚染を防ぐために開封しないでください。検査前に、70％アルコール綿球を使用して外表面を消毒します。
6.10.各操作中に、無菌操作の信頼性をチェックするためにネガティブコントロールを実行する必要があります。
6.11。菌液を吸引する場合は必ず吸引ボールを使用して吸引してください。ストローに直接口をつけないでください。
6.12接種針は使用の前後に火炎滅菌する必要があります。冷却後、培養物に接種できます。
6.13。菌液の入ったストロー、試験管、シャーレなどの器具は、5％ライゾール溶液を入れた滅菌バケツに浸して消毒し、24時間後に取り出して洗い流してください。
6.14。テーブルや床に細菌の液体がこぼれた場合は、すぐに 5% 石炭酸溶液または 3% ライゾールを汚染領域に少なくとも 30 分間かけてから処理してください。作業服や帽子が菌液で汚染されている場合は、直ちに脱いで高圧蒸気滅菌を行って洗濯してください。
6.15。生きた細菌を含むすべてのアイテムは、水道ですすぐ前に消毒する必要があります。下水道を汚染することは固く禁じられています。
6.16無菌室内のコロニーの数は毎月チェックする必要があります。クリーンベンチを開いた状態で、内径90mmの滅菌シャーレを数枚取り、約45℃に溶かして冷却した寒天培地約15mlを無菌注入します。固化後、30～35℃のインキュベーター内で上下を逆にして48時間培養します。無菌であることを証明した後、プレートを 3 ～ 5 枚取り出し、作業位置の左、中央、右に置きます。蓋を開けて 30 分間放置した後、30 ～ 35℃の恒温器に逆さにして 48 時間放置し、取り出します。診る。クラス 100 のクリーン エリア内のプレート上の雑菌の平均数は 1 コロニーを超えてはならず、クラス 10000 のクリーン ルーム内の平均雑菌数は 3 コロニーを超えてはなりません。制限を超えた場合は、繰り返しの検査で要件を満たすまで、無菌室を徹底的に消毒する必要があります。
7. 「医薬品衛生検査方法」および「中国医薬品検査標準業務慣行」の章（無菌検査方法）を参照してください。
8. 物流部門：品質管理部門
クリーンルームの技術指導:
無菌環境と無菌材料を入手した後、特定の既知の微生物を研究したり、その機能を利用したりするには、無菌状態を維持する必要があります。そうしないと、外部からさまざまな微生物が混入しやすくなります。外部から無関係な微生物が混入する現象を微生物学では汚染菌と呼びます。汚染を防ぐことは、微生物学の研究において重要な技術です。一方では完全な滅菌、もう一方では汚染の防止が無菌技術の 2 つの側面です。さらに、研究対象の微生物、特に自然界には存在しない病原性微生物や遺伝子組み換え微生物が実験容器から外部環境に漏出するのを防がなければなりません。これらの目的のために、微生物学では多くの対策があります。
無菌室は通常、微生物研究室に特別に設置された小さな部屋です。シートとガラスで構築できます。面積は大きすぎず、約4〜5平方メートル、高さは約2.5メートルにする必要があります。バッファールームは無菌室の外に設置する必要があります。空気の流れにより雑菌が持ち込まれるのを防ぐため、バッファールームのドアと無菌室のドアは同じ方向を向いてはいけません。無菌室と緩衝室は両方とも気密でなければなりません。室内換気設備には空気濾過装置が必要です。無菌室の床と壁は滑らかで、汚れがつきにくく、掃除が簡単でなければなりません。作業面は水平である必要があります。無菌室と緩衝室の両方に紫外線ライトが装備されています。無菌室の紫外線ライトは作業面から 1 メートル離れています。無菌室に入るスタッフは、滅菌済みの服と帽子を着用する必要があります。
現在、無菌室は微生物工場に多く存在し、一般の研究室ではクリーンベンチが使用されています。クリーンベンチの主な機能は、層流装置を用いて作業面上の微生物を含む様々な微小な塵埃を除去することです。この電気装置により、空気が hepa フィルターを通過して作業面に入ることができるため、作業面は常に無菌空気の流れの制御下に保たれます。また、外部に近い側には高速エアカーテンがあり、外部からの細菌空気の侵入を防ぎます。
条件が厳しい場所では、クリーンベンチの代わりに木製の滅菌ボックスを使用することもできます。シンプルな構造で移動も簡単な滅菌ボックスです。ボックスの前面には 2 つの穴があり、操作していないときはプッシュプル ドアによって塞がれます。操作中に腕を伸ばすことができます。前面上部にはガラスが装備されており、内部の操作が容易です。ボックス内には紫外線ランプがあり、側面の小扉から器具やバクテリアを入れることができます。
無菌操作技術は現在、微生物の研究と応用において極めて重要な役割を果たしているだけでなく、多くのバイオテクノロジーでも広く使用されています。例えば、トランスジェニック技術、モノクローナル抗体技術など。
投稿時刻: 2024 年 3 月 6 日