1. 目的：この手順は、無菌操作および無菌室の保護のための標準化された手順を提供することを目的としています。
2. 適用範囲：生物学的検査ラボ
3. 責任者：品質管理監督者／試験担当者
4.定義：なし
5．安全上の注意
微生物汚染を防ぐため、厳格に無菌操作を実施してください。作業者は、無菌室に入る前に紫外線ランプを消灯する必要があります。
6.手順
6.1. 無菌室には、無菌手術室と緩衝室を設けること。無菌手術室の清浄度はクラス10000に達すること。室内温度は20～24℃、湿度は45～60%に維持すること。クリーンベンチの清浄度はクラス100に達すること。
6.2. 無菌室は清潔に保ち、汚染を防ぐためにゴミを積み上げることは厳禁である。
6.3. 滅菌装置および培養培地の汚染を厳重に防止すること。汚染が確認された場合は、使用を中止すること。
6.4. 無菌室には、5%クレゾール溶液、70%アルコール、0.1%クロルメチオニン溶液などの作業濃度消毒剤を備えておく必要があります。
6.5. 滅菌室は、滅菌室の清潔さが要件を満たしていることを保証するために、適切な消毒剤を使用して定期的に滅菌および清掃する必要があります。
6.6. 滅菌室に持ち込む必要のあるすべての器具、食器、その他の物品は、しっかりと包装し、適切な方法で滅菌する必要があります。
6.7. 滅菌室に入る前に、スタッフは石鹸または消毒剤で手を洗い、緩衝室で専用の作業服、靴、帽子、マスク、手袋に着替える（または滅菌室に入る前に70%エタノールで再度手を拭く）必要があります。細菌チャンバー内で作業を行います。
6.8. 無菌室を使用する前に、無菌室内の紫外線ランプを点灯して30分以上照射殺菌を行い、同時にクリーンベンチを作動させて送風を行う必要があります。作業完了後、無菌室を速やかに清掃し、その後20分間紫外線殺菌を行う必要があります。
6.9. 検査前に、試験サンプルの外装は破損させず、開封して汚染を防いでください。検査前に、70%アルコール綿球を使用して外装表面を消毒してください。
6.10. 各操作中に、無菌操作の信頼性を確認するために陰性対照を実施する必要があります。
6.11. 細菌を含む液体を吸収する際は、必ず吸引ボールを使用して吸収してください。ストローを直接口で触らないでください。
6.12. 接種針は、使用前と使用後に必ず火炎滅菌しなければならない。冷却後、培養液を接種することができる。
6.13. 細菌液を含むストロー、試験管、ペトリ皿、その他の器具は、消毒のために5%リゾール溶液の入った滅菌バケツに浸し、24時間後に取り出してすすぐ必要があります。
6.14. テーブルや床に細菌を含む液体がこぼれた場合は、直ちに5%石炭酸溶液または3%ライソールを汚染箇所に30分以上かけてから処理してください。作業着や帽子が細菌を含む液体で汚染された場合は、直ちに脱ぎ、高圧蒸気滅菌後に洗濯してください。
6.15. 生きた細菌を含むすべての物品は、水道水で洗い流す前に消毒しなければなりません。下水道を汚染することは固く禁じられています。
6.16. 無菌室内のコロニー数は毎月チェックする必要があります。クリーンベンチを開けた状態で、内径90mmの滅菌済みペトリ皿を数枚取り、約45℃まで溶かして冷ました栄養寒天培地約15mlを無菌的に注入します。固まったら、30～35℃のインキュベーターに逆さまにして48時間培養します。無菌性を確認したら、3～5枚のプレートを取り、作業位置の左、中央、右に配置します。蓋を開けて30分間露出させた後、30～35℃のインキュベーターに逆さまにして48時間培養し、取り出して検査します。クラス100のクリーンエリアではプレート上の雑菌の平均数は1コロニーを超えてはならず、クラス10000のクリーンルームでは平均数は3コロニーを超えてはなりません。制限値を超えた場合は、繰り返し検査を行い、基準値を満たすまで、滅菌室を徹底的に消毒する必要がある。
7. 「医薬品衛生検査方法」および「中国医薬品検査標準作業手順書」の「無菌検査方法」の章を参照してください。
8. 流通部門：品質管理部門
クリーンルームに関する技術ガイダンス：
無菌環境と無菌材料を入手した後、特定の既知の微生物を研究したり、その機能を利用したりするためには、無菌状態を維持しなければなりません。そうしないと、外部から様々な微生物が容易に混入してしまう可能性があります。外部から無関係な微生物が混入する現象は、微生物学では汚染細菌と呼ばれます。汚染の防止は、微生物学研究において重要な技術です。無菌操作の2つの側面は、一方では完全な滅菌、他方では汚染の防止です。さらに、研究対象の微生物、特に自然界には存在しない病原性微生物や遺伝子組み換え微生物が、実験容器から外部環境に漏れ出さないようにしなければなりません。これらの目的のために、微生物学では多くの対策が講じられています。
無菌室は通常、微生物学実験室に特別に設けられた小さな部屋です。板とガラスで構築できます。面積は4～5平方メートル程度で、高さは約2.5メートル程度が適切です。無菌室の外側に緩衝室を設ける必要があります。緩衝室のドアと無菌室のドアは、空気の流れによって様々な細菌が持ち込まれるのを防ぐため、同じ方向を向いていてはいけません。無菌室と緩衝室はどちらも気密でなければなりません。室内換気装置には空気ろ過装置が必要です。無菌室の床と壁は滑らかで、汚れが溜まりにくく、清掃しやすいものでなければなりません。作業面は水平でなければなりません。無菌室と緩衝室の両方に紫外線ランプが設置されます。無菌室の紫外線ランプは作業面から1メートル離れた場所に設置します。無菌室に入るスタッフは、滅菌済みの衣服と帽子を着用する必要があります。
現在、無菌室は主に微生物学関連の工場に設置されていますが、一般的な実験室ではクリーンベンチが使用されています。クリーンベンチの主な機能は、層流空気装置を用いて作業面上の微生物を含む様々な微細な塵埃を除去することです。この電気式装置は、空気をHEPAフィルターに通してから作業面に送り込むことで、作業面を常に清浄な空気の流れで制御します。さらに、外部に近い側面には高速エアカーテンが設置されており、外部からの細菌性空気の侵入を防ぎます。
環境条件が厳しい場所では、クリーンベンチの代わりに木製の滅菌ボックスを使用することもできます。滅菌ボックスは構造がシンプルで移動も容易です。ボックス前面には2つの開口部があり、使用しないときはプッシュプル式の扉で塞ぐことができます。操作中は腕を差し込むことができます。前面上部にはガラスが取り付けられており、内部操作が容易になっています。ボックス内部には紫外線ランプがあり、側面の小さな扉から器具や細菌を投入できます。
無菌操作技術は現在、微生物学の研究や応用において極めて重要な役割を果たしているだけでなく、多くのバイオテクノロジー分野でも広く利用されている。例えば、遺伝子組み換え技術、モノクローナル抗体技術などが挙げられる。
投稿日時：2024年3月6日