1. 目的: この手順は、無菌操作および無菌室の保護のための標準化された手順を提供することを目的としています。
2. 適用範囲：生物試験研究室
3. 責任者：QCスーパーバイザーテスター
4.定義: なし
5. 安全上の注意
微生物汚染を防ぐために無菌操作を厳密に実行し、操作者は無菌室に入る前に UV ランプをオフにする必要があります。
6.手順
6.1. 無菌室には、無菌手術室と緩衝室を設ける。無菌手術室の清浄度はクラス10000に達する必要がある。室内温度は20～24℃、湿度は45～60%に維持する必要がある。クリーンベンチの清浄度はクラス100に達する必要がある。
6.2. 無菌室は清潔に保たれなければならず、汚染を防ぐためにゴミを積み重ねることは厳禁です。
6.3. 全ての滅菌機器および培地の汚染を厳重に防止してください。汚染されたものは使用を中止してください。
6.4. 無菌室には、5%クレゾール溶液、70%アルコール、0.1%クロルメチオニン溶液などの作業濃度の消毒剤を備える必要があります。
6.5. 無菌室は定期的に適切な消毒剤を使用して滅菌および清掃し、無菌室の清潔さが要件を満たしていることを保証する必要があります。
6.6. 滅菌室に持ち込む必要のあるすべての器具、機器、食器、その他の物品は、しっかりと包装し、適切な方法で滅菌する必要があります。
6.7. 無菌室に入る前に、スタッフは石鹸または消毒液で手を洗い、緩衝室で専用の作業服、靴、帽子、マスク、手袋に着替えるか（または70%エタノールで再度手を拭く）、滅菌室に入る前に必ず手指消毒を行う。作業は細菌チャンバー内で行う。
6.8. 無菌室を使用する前に、無菌室の紫外線ランプを点灯し、30分以上照射滅菌を行うとともに、クリーンベンチも同時に稼働させてエアブローを行う必要があります。作業終了後は、無菌室を適時に清掃し、さらに20分間紫外線滅菌を行う必要があります。
6.9. 検査前には、汚染を防ぐため、試験サンプルの外箱は開封せず、無傷の状態で保管してください。検査前に、70%アルコール綿球を使用して外表面を消毒してください。
6.10. 各操作中は、無菌操作の信頼性を確認するためにネガティブコントロールを実施する必要があります。
6.11. 細菌液を吸い取る際は、必ず吸引ボールを使用してください。ストローに直接口を触れないでください。
6.12. 接種針は使用前後に必ず火炎滅菌し、冷却後、培養物を接種してください。
6.13. 細菌液の入ったストロー、試験管、ペトリ皿、その他の器具は、5%のリゾール溶液が入った滅菌バケツに浸して消毒し、24時間後に取り出してすすいでください。
6.14. テーブルや床に細菌液がこぼれた場合は、直ちに汚染箇所に5%石炭酸溶液または3%リゾールを少なくとも30分間かけ、その後処理してください。作業服や帽子が細菌液に汚染された場合は、直ちに脱ぎ、高圧蒸気滅菌後、洗浄してください。
6.15. 生きた細菌を含むすべての物品は、蛇口で洗い流す前に必ず消毒してください。下水道を汚染することは固く禁じられています。
6.16. 無菌室のコロニー数は毎月確認する必要があります。クリーンベンチを開いた状態で、内径90 mmの滅菌ペトリ皿を数枚取り、約45℃に溶かして冷却した栄養寒天培地約15 mlを無菌的に注入します。固化後、30〜35℃のインキュベーターで逆さまに置いて48時間培養します。無菌性が証明された後、3〜5枚のプレートを取り、作業位置の左、中央、右に置きます。カバーを開けて30分間さらした後、30〜35℃のインキュベーターで逆さまに置いて48時間置き、取り出して調べます。クラス100のクリーンエリアのプレート上の雑菌の平均数は1コロニーを超えてはならず、クラス10000のクリーンルームの平均数は3コロニーを超えてはなりません。限度を超えた場合は、繰り返し検査して要件を満たすまで無菌室を徹底的に消毒する必要があります。
7. 『医薬品衛生検査方法』および『中国医薬品検査標準操作規範』の（無菌検査方法）の章を参照してください。
8. 流通部門：品質管理部門
クリーンルーム技術ガイダンス：
無菌環境と無菌材料を入手した後、特定の既知の微生物を研究したり、その機能を利用したりするためには、無菌状態を維持する必要があります。そうしないと、外部からさまざまな微生物が容易に混入する可能性があります。外部から無関係な微生物が混入する現象は、微生物学では汚染細菌と呼ばれます。汚染を防ぐことは、微生物学の研究において重要な技術です。完全な滅菌と汚染の防止は、無菌技術の2つの側面です。さらに、研究対象の微生物、特に病原性微生物や自然界には存在しない遺伝子組み換え微生物が、実験容器から外部環境に漏れ出すのを防ぐ必要があります。微生物学では、これらの目的のために多くの対策が講じられています。
無菌室は通常、微生物学実験室に特別に設けられた小部屋です。シートとガラスで作ることができます。面積は大きすぎず、約 4-5 平方メートル、高さは約 2.5 メートルにする必要があります。無菌室の外にバッファー室を設置する必要があります。バッファー室のドアと無菌室のドアは同じ方向を向いてはならず、気流によって雑菌が入り込むのを防ぎます。無菌室とバッファー室はどちらも気密にする必要があります。室内の換気設備には空気濾過装置が必要です。無菌室の床と壁は滑らかで、汚れがたまりにくく、掃除しやすいものでなければなりません。作業面は水平にする必要があります。無菌室とバッファー室の両方に紫外線ライトが装備されています。無菌室内の紫外線ライトは作業面から 1 メートル離れています。無菌室に入るスタッフは、滅菌済みの服と帽子を着用する必要があります。
現在、滅菌室は主に微生物学の工場に設置されており、一般的な研究室ではクリーンベンチが使用されています。クリーンベンチの主な機能は、層流気流装置を用いて作業面上の微生物を含む様々な微細な塵埃を除去することです。電動装置により、空気はHEPAフィルターを通過してから作業面に流入するため、作業面は常に無菌空気の流れに保たれます。さらに、外部に近い側には高速エアカーテンが設置されており、外部の細菌空気の侵入を防ぎます。
条件が厳しい場所では、クリーンベンチの代わりに木製の滅菌ボックスを使用することもできます。滅菌ボックスは構造がシンプルで移動が容易です。ボックス前面には2つの穴があり、非操作時はプッシュプルドアで塞がれています。操作時は腕を伸ばすことができます。前面上部はガラス張りで、内部の操作を容易にしています。ボックス内には紫外線ランプが設置されており、側面の小さなドアから器具や細菌を投入できます。
無菌操作技術は現在、微生物学的研究と応用において重要な役割を果たしているだけでなく、多くのバイオテクノロジー分野でも広く利用されています。例えば、遺伝子組み換え技術、モノクローナル抗体技術などが挙げられます。
投稿日時: 2024年3月6日